昆蟲組織蛋白酶B（CTSB）ELISA試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

樣本類型：血清、血漿、組織、細(xì)胞上清或其他生物樣本

檢測(cè)方法：雙抗夾心法

儲(chǔ)藏及保存：2-8度，6個(gè)月

檢測(cè)原理：

將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體，將未結(jié)合的抗體洗凈后再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（O.D.值），計(jì)算樣品濃度。

產(chǎn)品內(nèi)容：

實(shí)驗(yàn)所需儀器及設(shè)備：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

第一步：試劑盒室溫平衡 30min ，然后從鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

第二步：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL。

第三步：樣本孔中加入待測(cè)樣本 50μL；空白孔不加。

第四步：除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

第五步：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

第六步：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

第七步：每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 O.D 值。

注：

昆蟲組織蛋白酶B（CTSB）ELISA試劑盒

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

◆ 仔細(xì)閱讀說(shuō)明書
◆ 檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過(guò)有效期，請(qǐng)勿使用。
◆ 按說(shuō)明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）
◆ 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。
短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存
◆ 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品， （比如移液器，試管，清洗器， 酶標(biāo)儀）
◆ 按說(shuō)明書將所用試劑平衡至室溫，根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量
◆ 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件，保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書推薦的條件存儲(chǔ)。
◆ 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測(cè)稀釋液，可能在設(shè)計(jì)時(shí)就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之前，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標(biāo)板之前，必需不停攪拌。
◆ 保證充分的孵育時(shí)間和溫度。
◆ 切勿使用不同生產(chǎn)批號(hào)的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。
◆ 在混合或溶解蛋白溶液時(shí)，避免泡沫產(chǎn)生。
◆ 在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，安排好實(shí)驗(yàn)流程。
◆ 在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，清潔工作臺(tái)。
◆ 若有問(wèn)題，應(yīng)與我公司或代理商進(jìn)行溝通。

我的標(biāo)準(zhǔn)曲線是平的或者是非線性的，這可能是由于什么原因引起的？
引起不理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線的原因有很多，常見(jiàn)的原因例舉如下：
◆ 確定稀釋是否得當(dāng)。
◆ 確定波長(zhǎng)是否正確。
◆ 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品必需在15-20分鐘內(nèi)滴加入板內(nèi)。（除非試劑盒內(nèi)說(shuō)明書特別說(shuō)明）
◆ 檢查背景是否過(guò)高。
◆ 確定酶標(biāo)板是否正確洗滌。 不恰當(dāng)?shù)南礈炜赡軙?huì)引起具有高背景的平直曲線。
◆ 在測(cè)定過(guò)程中重復(fù)讀板。在超過(guò)建議時(shí)間后讀板會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
◆ 如果高的標(biāo)準(zhǔn)品的讀數(shù)超過(guò)了酶標(biāo)儀的范圍，確定標(biāo)準(zhǔn)品是否正確溶解，孵育時(shí)間和溫度是否準(zhǔn)確。
◆ 為保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性請(qǐng)重復(fù)測(cè)定。
◆ 如果使用對(duì)照，對(duì)照的濃度必須在測(cè)定范圍內(nèi)。
◆ 在檢測(cè)和孵育過(guò)程中確定試劑沒(méi)有被污染。
◆ 沒(méi)有任何信號(hào)的平直標(biāo)準(zhǔn)曲線可能是由于酶結(jié)合物或者底物沒(méi)有反應(yīng)。 檢查各個(gè)操作過(guò)程
◆ 由于許多酶標(biāo)儀的限制，因此建議標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)由高向低做復(fù)孔。

我是否可以更改底物處理的方法？
◆ 如果反應(yīng)物溶液需要混合，確保加入的反應(yīng)物試劑體積正確并充分混合。混合后的溶液必需在15分鐘內(nèi)使用（化學(xué)發(fā)光檢測(cè)多4小時(shí)）。如果反應(yīng)物混合得太早，則在容器中的顏色可能會(huì)發(fā)生變化。
◆ 如果底物是凍干品或片劑，則根據(jù)說(shuō)明書中的方法用適當(dāng)體積的稀釋液將其*溶解?；旌?后并在說(shuō)明書中推薦的時(shí)間內(nèi)使用。

我在移液的時(shí)候是否要按照一定的順序？
◆ 根據(jù)說(shuō)明書中的順序進(jìn)行移液操作。
◆ 高靈敏度檢測(cè)利用了放大系統(tǒng)。在底物孵育完成之后，按照加底物的順序依次加入放大試劑。
◆ 底物加完之后，輕拍酶標(biāo)板使其充分混合。
底物有可能被污染嗎？
◆ 是的。如果測(cè)定時(shí)使用的是堿性磷酸酶或者辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的結(jié)合物，在測(cè)定時(shí)要注意避免污染。污染可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生超過(guò)酶標(biāo)儀范圍的值。避免與金屬或氧化試劑接觸。使用新容器。
底物是否需要在黑暗環(huán)境中進(jìn)行孵育？
◆ 不需要。不過(guò)在孵育過(guò)程中應(yīng)避免陽(yáng)光直射。

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